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植物脯氨酸檢測(cè)試劑盒

植物脯氨酸檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品編號(hào):PP5040

產(chǎn)品規(guī)格:50次

數(shù)量
價(jià)格 ¥400


植物脯氨酸檢測(cè)試劑盒(茚三酮比色法)

Plant Proline Assay Kit with Ninhydrin

產(chǎn)品組成:

組分貨號(hào)

名稱

規(guī)格

貯存

PP5040-01

試劑1-Pro裂解液

125 ml

RT

PP5040-02

試劑2-Pro標(biāo)準(zhǔn)液

1 ml

4℃

PP5040-03

試劑3-Pro顯色液

50 ml

4 避光

●  產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

脯氨酸(Proline,Pro)是一種環(huán)狀的α-亞氨基酸,呈中性,等電點(diǎn)為6.30,易溶于水。在正常環(huán)境情況下脯氨酸含量較低,但在逆境下(旱、熱、冷、凍、鹽堿等),脯氨酸常有明顯積累,即積累指數(shù)與植物的抗逆性有關(guān)。植物脯氨酸檢測(cè)試劑盒(茚三酮比色法)檢測(cè)原理是脯氨酸與茚三酮共熱發(fā)生反應(yīng),能產(chǎn)生穩(wěn)定的紅色產(chǎn)物,以分光光度計(jì)測(cè)定處吸光度,在一定范圍內(nèi)顏色深淺(即吸光度)與脯氨酸濃度成正比。

該試劑盒不使用甲苯等有害溶劑,經(jīng)濟(jì)環(huán)保。

該試劑盒主要用于測(cè)定植物組織中的游離脯氨酸含量,不適用于動(dòng)物及醫(yī)療樣品中脯氨酸的測(cè)定。

按照一次使用1 ml Pro顯色液計(jì)算,試劑盒可以使用50次。

自備材料:

植物根莖、葉子等;剪刀;螺蓋離心管或鎖蓋離心管或96孔板;1ml玻璃比色皿;分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀;水浴鍋或干浴器;離心機(jī)

操作步驟:

1 樣本處理:

取新鮮植物組織,清洗干凈,擦干,剪碎,迅速稱取, 按照20mg重量加入1ml Pro裂解液(注意是否已經(jīng)加入無水乙醇)的比例加入Pro裂解液(建議使用1.5ml螺口離心管或鎖蓋離心管),沸水浴或干浴處理20分鐘 (期間間歇混勻),10000 rpm離心 2分鐘,上清即為脯氨酸提取液,4℃保存?zhèn)溆?。待測(cè)提取液如不能及時(shí)測(cè)定,應(yīng)置于-20℃保存,1-2天內(nèi)穩(wěn)定。

2 配制系列脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液:

取1ml 試劑1-Pro裂解液全部加入到試劑2-Pro標(biāo)準(zhǔn)液的小管中,混勻后徹底溶解,即配成的Pro標(biāo)準(zhǔn)液(100mg/ml)。

取1 μl 100mg/ml 標(biāo)準(zhǔn)液加入到1ml Pro裂解液中,即配成100μg/ml Pro標(biāo)準(zhǔn)液待用。參照下表配制1-6號(hào)不同濃度的Pro標(biāo)準(zhǔn)溶液。

 

編號(hào)

1

2

3

4

5

6

7

8

100μg/ml Pro標(biāo)準(zhǔn)液加入量(ml

0.01

0.02

0.04

0.06

0.08

0.10

0.15

0.2

Pro裂解液(ml

0.49

0.48

0.46

0.44

0.42

0.4

0.35

0.3

脯氨酸含量(μg

1

2

4

6

8

10

15

20

4、 樣品測(cè)定:

= 1 \* GB3 分光光度計(jì)測(cè)定:參考下表設(shè)置反應(yīng)混合液,依次加入試劑:

編號(hào)

0

1-8

9-X

 

空白管

標(biāo)準(zhǔn)管

測(cè)定管

試劑1-Pro裂解液

0.5 ml

-

-

步驟1中的脯氨酸提取液

-

-

0.5 ml

Pro標(biāo)準(zhǔn)液(步驟31-8管)

-

0.5 ml

-

試劑3-Pro顯色液

1 ml

1 ml

1 ml

③ 水浴煮沸或干浴20分鐘,間歇混勻。加熱時(shí)務(wù)必注意避免液體暴沸濺出,可使用鎖蓋離心管或螺旋蓋離心管。

④ 冰浴或流水冷卻至室溫,10000 rpm離心 2分鐘,如發(fā)現(xiàn)沒有不溶物,也可以不離心。 

⑤ 取上清,用空白管作為對(duì)照,取1ml反應(yīng)混合液用分光光度計(jì)測(cè)定520nm吸光度值。

= 6 \* GB3 酶標(biāo)儀測(cè)定:參考下表設(shè)置反應(yīng)混合液,依次加入試劑:

 

空白管

標(biāo)準(zhǔn)管

測(cè)定管

試劑1-Pro裂解液

50 μl

-

-

步驟1中的脯氨酸提取液

-

-

50 μl

Pro標(biāo)準(zhǔn)液(步驟31-8管)

-

50 μl

-

試劑3-Pro顯色液

100 μl

100 μl

100 μl

 5、 計(jì)算:

以系列脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)(1-8號(hào)管)含量(μg)為橫坐標(biāo),以對(duì)應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo),制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)測(cè)定管的吸光度進(jìn)而計(jì)算其脯氨酸含量。

如使用分光光度計(jì)測(cè)定,根據(jù)如下公式計(jì)算具體樣品中脯氨酸的含量:

植物組織樣品脯氨酸含量(μg/g)=1.5(C×VT)/(W×VS) =3C/W


VT=步驟1中脯氨酸提取液總體積(ml),此處為1ml

W=步驟1中使用的樣品鮮重(g)

VS=步驟4中測(cè)定時(shí)加入的脯氨酸提取液體積(ml),本實(shí)驗(yàn)為0.5ml

1.5系數(shù)為步驟4中反應(yīng)混合液體積為1.5ml,取1ml測(cè)定吸光值



 
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